大连美仑生物技术有限公司

Apoptosis Bcl-2 Bcl-6 Caspase Ferroptosis Mdm2 p53 RIP kinase Survivin TNF-alpha Cuproptosis IAP Metabolic Enzyme/Protease PDHK ROS Kinase Phosphatase MDM-2/p53 Kinesin PKC HSP Autophagy TNF Receptor FKBP Bcl-2 Family Pyroptosis DAPK PKD EBV Glutathione Peroxidase Transferrin Receptor c-Myc Necroptosis ASK1 Thymidylate Synthase

Autophagy

Autophagy LRRK2 Estrogen/progestogen PINK1/Parkin Dynamin Anti-infection Oxidative Phosphorylation Akt AMPK JAK Toll-like Receptor (TLR) ULK p62 Atg8/LC3 Atg7 Atg4 AUTACs

Epigenetics

DNA Methyltransferase DNMT Epigenetic Reader Domain Histone Acetyltransferase Histone demethylases Histone Methyltransferase PKC AMPK HDAC JAK MicroRNA Protein Arginine Deiminase Phosphodiesterase (PDE)

GPCR/G Protein

Adenosine Receptor Angiotensin Receptor Cannabinoid Receptor CaSR E1 Activating CRFR E2 conjugating E3 Ligase Endothelin Receptor GHSR Glucagon Receptor GLP-1R GPCR19(TGR5) GPR GPR119 GPR40(FFAR1) Imidazoline Receptor Leukotriene Receptor LPA Receptor OX Receptor Protease-activated Receptor Rac Prostaglandin Receptor Oxytocin Receptor Ras Rho S1P Receptor Sigma Receptor 5-HT Receptor Neurokinin Receptor mAChR GCGR LPL Receptor Dopamine Receptor Guanylate Cyclase Histamine Receptor CXCR CCR GPR35 P2Y Receptor Opioid Receptor GPR68 mGluR Formyl Peptide Receptor (FPR) Platelet-activating Factor Rec GnRH Receptor Protease Activated Receptor (P Vasopressin Receptor Chemerin Receptor Melatonin Receptor MCHR1 (GPR24) Orexin Receptor (OX Receptor) RGS Protein CGRP Receptor Free Fatty Acid Receptor

Immunology/Inflammation

AhR CCR COX Complement 5(C5) CXCR Histamine Receptor IL Receptor Immunology IL-5 NOD1 IL-12 PD-1 IL-17 PDL-1 reactive oxygen species (ROS) NLRP3 TLR STING Toll-like Receptor (TLR) Bcr-Abl Salt-inducible Kinase (SIK) Glucocorticoid Receptor IRAK SphK Interleukin Related PGE synthase Macrophage migration inhibitor Complement System MyD88 FLAP Thrombopoietin Receptor Arginase NO Synthase AP-1 Nuclear Factor of activated T IFNAR CD276/B7-H3 CD3 CD38 CD28 CD22 CD20 CD19 Aryl Hydrocarbon Receptor PD-1/PD-L1 NOD-like Receptor (NLR) Mesothelin Mucin NTPDase PSMA SOD DOCK CD74 CD6 CD73 CTLA-4 CX3CR1 Cyclic GMP-AMP Synthase FAP Galectin Cyclophilin P-selectin CD2 CD47 Tim3 TROP2 Glycoprotein VI Kallikrein LAG-3 VAP-1 BCL6

Integrin

JAK-STAT/IL6

JAK STAT IL-6 Pim EGFR

MAPK

ErbB2 ERK JNK MEK p38 MAPK Mixed Lineage Kinase Raf

Membrane Transporter/Ion Chann

Amino acid transporter antagon ATPase Calcium Channel CFTR Chloride channel CRM1 GABA Receptor GluR iGluR NMDAR P-gp Potassium Channel Proton Pump SGLT Sodium Channel TRPV P-glycoprotein Na+/K+ ATPase Piezo Channel Fat Mass and Obesity-associate TRP Channel BCRP nAChR CRAC Channel Apical Sodium-Dependent Bile A P2X Receptor Monocarboxylate Transporter Na+/HCO3- Cotransporter GlyT OAT NKCC Monoamine Transporter HCN Channel EAAT Ferroportin GLUT Na+/H+ Exchanger (NHE) Na+/Ca2+ Exchanger FATP ATP Synthase ASCT VDAC Urea Transporter URAT1 Aquaporin Calmodulin

Metabolic Enzyme/Protease

5-alpha Reductase Aminopeptidase ATP-citrate lyase in Carbonic Anhydrase CETP DGAT DPP-4 Factor Xa FOX FXR Glucokinase(GK) GSNOR HCV Protease HIF HMG-CoA Reductase HSP IDO Lactate Dehydrogenase Integrase MMP NAMPT P450 PAI-1 PDE PGC-1α Phospholipase Procollagen C Protein Proteases PKM Proteasome RAR/RXR Retinoid Receptor Serine Protease Thrombin Transferase Xanthine Oxidase p38-MAPK Stearoyl-CoA Desaturase (SCD) Mitochondrial Metabolism (MPC) Tyrosinase Endogenous Metabolite Phosphatase Pyruvate Kinase PDI Phosphodiesterase (PDE) HIF/HIF Prolyl-Hydroxylase Hexokinase Ser/Thr Protease Carboxylesterase Cathepsin Cytochrome P450 Drug Metabolite E1/E2/E3 Enzyme Angiotensin-converting Enzyme HMG-CoA Reductase (HMGCR) Aldose Reductase Oxidative Phosphorylation NADPH Oxidase Lipoxygenase DAGL MAGL MALT1 Adenosine Kinase COMT Glutathione S-transferase Adenosine Deaminase Acyltransferase Enolase Aldehyde Dehydrogenase (ALDH) Farnesyl Transferase Glucosidase PDHK Fatty Acid Synthase (FASN) Dipeptidyl Peptidase Methylenetetrahydrofolate Dehy Dihydroorotate Dehydrogenase Renin FAAH SGK Dopamine β-hydroxylase HIV Integrase Adiponectin Receptor ROR LXR Mineralocorticoid Receptor REV-ERB Amine N-methyltransferase

Neuronal Signaling

5-HT Receptor AChR BACE Beta Amyloid Beta-secretase CaMK CGRP Receptor Dopamine Receptor FAAH Gamma-secretase GlyT iGluR MAO mAChR Opioid Receptor Serotonin Transporter Legumain γ-secretase Notch Monoamine Oxidase Trk Receptor Cholinesterase (ChE) Imidazoline Receptor Amyloid-β Dopamine Transporter Sigma Receptor Glucosylceramide Synthase (GCS

NF-κB

NF-κB Nrf2 IκB/IKK Reactive Oxygen Species Keap1-Nrf2 IKK RANKL/RANK

Others

Androgen Receptor Aromatase CD20 CD52 c-Myc CPT1 c-RET CTLA-4 Decarboxylase Dehydrogenase FPR GLUT Glutaminase HIV ProteaseAnti-infection HSP90 Hydroxylase IAP IgE IRE1 LDL Lipase Lipoxygenase Lysyl Hydroxylase MT Receptor NADPH oxidase others P2 Receptor PAFR PCSK9 RAAS RANK Ligand Reverse Transcriptase S6 Kinase Thioredoxin Tie-2 SARM Vasopressin Receptor VDA Vitamin D Related CDA TrxR PDE IDO

PI3K/Akt/mTOR

Akt MELK mTOR GSK-3 PDK-1 PI3K PIKfyve PTEN RSK AMPK PI4K PIN1

Protein Tyrosine Kinase/PTK

ACK ALK Axl Bcr-Abl BTK cAMP(PKA) c-Kit c-Met CSF-1R DYRK EGFR Ephrin receptor FAK FGFR FLT3 HER2 IGF-1R MET Insulin Receptor PDGFR PKA ROS Src Syk Trk receptor VEGFR

Stem Cell /Wnt

c-Jun Hedgehog/Smoothened Hippo pathway Met stemness kinase OCT Wnt/β-catenin Adenylate Cyclase YAP PKA TGF-beta/Smad Gli Wnt sFRP-1 Smo Organoid Hedgehog Porcupine PKG Hippo (MST) Oct3/4 β-catenin BMI1

TGF-beta/Smad

TGF-beta/Smad TGF-β Receptor PKC PKA

Cell Cycle/DNA Damage

Antifolate APC ATM/ATR Aurora Kinase BMI-1 Casein Kinase CDK CD38 Chk DHFR DNA alkylator DNA-PK DNA/RNA Synthesis DUB Dynamin HDAC HSP Kinesin Microtubule Associated p97 MTH1 PAK PERK PLK PPAR PARP ROCK Sirtuin RAD51 Telomerase TOPK Topoisomerase Wee1 Deubiquitinase NEKs OGG Polo-like Kinase (PLK) Microtubule/Tubulin Mps1 MASTL Haspin Kinase SRPK DNA Alkylator/Crosslinker ATF6 Checkpoint Kinase (Chk) G-quadruplex Nucleoside Antimetabolite/Anal Eukaryotic Initiation Factor ( CRISPR/Cas9 IRE1 MARK Epoxide Hydrolase

Protein Tyrosine Kinase/RTK

TAM Receptor ROS Kinase JAK Src VEGFR c-Met Syk ALK FAK IGF-1R FLT3 c-Met/HGFR PDGFR Bcr-Abl c-Fms Ephrin receptor FLT3 BTK Itk Anaplastic lymphoma kinase (AL Ack1 RET c-Kit FGFR EGFR Insulin Receptor Discoidin Domain Receptor BRK BMX Kinase SHP2 DYRK Tie Pyk2 GDNF Receptor

Epigenetics Histone

Methyltransferase

Anti-infection

HSV Flavivirus others Fungal Parasite HBV Bacterial Dengue virus HIV Filovirus Antibiotic VSV SARS-CoV Beta-lactamase HCV CMV Reverse Transcriptase Influenza Virus Arenavirus HIV Protease

MAPK/ERK Pathway

ERK p38 MAPK MEK MAP3K Ribosomal S6 Kinase (RSK) Raf JNK MAP4K KLF Mixed Lineage Kinase MNK

Vitamin D Related/Nuclear Rece

Estrogen Receptor/ERR Progesterone Receptor VD/VDR Androgen Receptor Thyroid Hormone Receptor Nuclear Hormone Receptor 4A/NR Constitutive Androstane Recept

Cytoskeleton

MARCKS Integrin Gap Junction Protein Myosin Polo-like Kinase (PLK) Annexin A Dynamin Arp2/3 Complex

Antibodydrug Conjugate/ADC Rel

ADC Cytotoxin Antibody-Drug Conjugates (ADCs Drug-Linker Conjugates for ADC

PROTAC

Molecular Glues PROTACs Ligands for Target Protein for PROTAC Linkers Ligands for E3 Ligase E3 Ligase Ligand-Linker Conjug PROTAC-Linker Conjugates for P Target Protein Ligand-Linker C SNIPERs LYTACs AUTOTACs

通用试剂类

氨基酸

氨基酸犬尿氨酸系列

胆酸系列

蛋白及衍生物

合成多肽

核酸及其衍生物

抗生素及抗病毒

抗生素及抗病毒抗真菌抗生素抗细菌抗生素抗肿瘤抗生素抗病毒化合物

酶辅酶

染色剂指示剂

生物缓冲剂

碳水化合物

碳水化合物多糖寡糖去垢剂

通用试剂

微生物检测

微生物培养基

维生素

显色及标记试剂

植物生长激素

其他生化试剂

其他生化试剂表面活性剂无机盐

还原剂

蛋白修饰

交联剂

表面活性剂/去垢剂

非离子表活剂/去垢剂阴离子表活剂/去垢剂阳离子表活剂/去垢剂

生物耗材

吸头类

常规吸头滤芯吸头（PCR用）

PCR类

离心管类

常规离心管

细胞培养类

细胞培养板细胞培养皿细胞冻存培养瓶

液体处理类

移液管

体外诊断

核心原料

亲和素

重组蛋白

IgG-Fc

植物研究相关

植物激素

赤霉素类(GA) 细胞分裂素(CTK) 油菜素甾醇(BR) 其他植物激素脱落酸（ABA）乙烯(ETH)

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细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)增强型

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产品问答

问

CCK-8两个波长都要测吗？需要怎样计算?

答

只测450nm下的OD值，细胞存活率 = [(As - Ab)／(Ac - Ab)] ×100% 抑制率 = [(Ac - As)／(Ac - Ab)] ×100% As：实验孔（含有细胞的培养基、CCK-8、待测药物）的吸光度 Ac：对照孔（含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测药物）的吸光度 Ab：空白孔（不含细胞和待测药物的培养基、CCK-8）的吸光度

问

每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？

答

可能会有以下几个原因： 1)当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。 2)有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3)每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000~100,000个/孔范围内摸索条件。 4) 重复试验请保证孵育时间、接种细胞数相同。

问

CCK-8会导致细胞死亡吗？

答

CCK-8本身对细胞毒性特别小，作用时间长不会导致细胞都死亡，但是细胞长满了，本身代谢会引起细胞死亡

问

CCK-8除了用酶标仪还可以用什么仪器？紫外分光光度计行么？

答

一般cck都是用酶标仪，紫外分光光度计最好不用，因为紫外我没记错一次只能测一个孔吧，而且还得把孔内液体吸出来到紫外用的皿里，而且检测时间很长，CCK-8对孵育时间敏感，这样误差太大了

问

OD值偏高？

答

可以确认下培养时间，一般肉眼可见颜色变化即可检测

问

做CCK-8经常有气泡，对吸光度有影响，有什么办法去除么？

答

有气泡，没办法去除，但是可以避免有气泡，加药什么的枪头抵着孔壁，慢点加液体，基本不会产生气泡

问

细胞能一边培养一边检测？

答

培养一段时间测CCK-8，然后换液后可以接着养。

问

反映时间怎么确定？数值必须是1么？

答

0.1-2.5都可以，最佳是1.0左右

问

如何设定空白对照

答

在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。

问

铺板细胞量有什么要求吗？

答

96孔板细胞建议铺板5000-10000个/孔；不同细胞类型接种密度不一致，客户可自行摸索，我们铺96孔板，一般密度5*10的4次方，取100ul；可以您自己对细胞计数，保证每孔细胞数量一致。或者可以计数，方法：按不同细胞数铺板，贴壁后加CCK-8，孵育1小时，然后检测，OD值在1.5左右是最佳铺板数

问

哪些物质会影响CCK-8的测定？

答

当有氧化还原性物质存在时会影响CCK-8的测定，因此当所加药物为氧化还原性物质时需要换液再进行检测。

问

CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？

答

不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养0.5-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。

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产品描述

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8），是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。

CCK-8试剂中含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）是一种类似于MTT的化合物，它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）存在条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan （参考图1），生成的Formazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析，细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

图1. WST-8检测原理图

WST-8与以往的增殖/毒性测定试剂相比，具有明显优点（参考表1）。美仑CCK-8试剂盒具有灵敏度高、反应时间短、线性范围宽、数据可靠、重现性好等特点，可以广泛应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

产品优势

★ 灵敏度高，线性范围宽，数据可靠，重现性好

★ 操作简便，省时省力

★ 甲瓒产物为水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞

★ 无需有机溶剂，对细胞毒性低

★ 即用型溶液，毋需预制，适合于高通量药物筛选

★ 检测效果与进口品牌相媲美

数据展示

采用某进口品牌CCK-8试剂盒作为对照，在相同的实验条件下，检测细胞活力。结果如图2所示，美仑CCK-8测得的吸光/细胞数目比值稍大，灵敏度稍高，与对照CCK-8相比实验差异小（在5%左右，几乎相当于不同批次之间的差异）。

图2. 使用美仑CCK-8与对照进口品牌CCK-8检测细胞数标准曲线的比较

保存条件

2-8℃避光保存，自生产之日起12个月有效；-20 ℃保存，24个月有效。反复冻融会增加背景值，干扰实验测定，因此请将经常使用的试剂保存在2-8℃。

使用方法

请参考说明书。

注意事项

1. 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
2. CCK-8反应时间的确定：一般情况下，白细胞显色比较困难，因此需要增加细胞数量和延长CCK-8反应时间。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色，因此悬浮细胞在加入CCK-8培养5-4小时后，可先从培养箱取出，目测或用酶标仪测定显色程度，若显色困难可以继续培养数小时后再确定。对于贴壁细胞，CCK-8的培养时间一般为0.5-4小时，在培养20分钟左右即可取出肉眼观察显色程度。
3. 每孔接种细胞数：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔（100 μL培养基）。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500个/孔（100 μL培养基）。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
4. 设定空白对照：在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验（细胞毒性实验）时，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
5. 影响CCK-8测定的物质：由于CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应，所以如果待测体系中存在氧化还原物质则可能会干扰检测结果，还原性物质会使吸光度增加，氧化性物质会使吸光度减小，因此应需设法去除这些物质的影响。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除只含有培养基的对照孔中本底吸光度而消除，因此不会对检测结果造成影响。
6. 测定波长：如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议采用双波长进行测定，检测波长450nm，参比波长600-650nm。如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度最高。
7. 当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
8. 如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。

9.为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

我司所售出产品仅供于科研研究用途（非临床科研研究），每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款。

英文名字：Cell Counting Kit-8

质量标准：Meilunbio