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Firefly-Glo萤光素酶报告基因检测试剂盒
总货号: MA0519
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产品简介:

Firefly-Glo萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒,具有高灵敏度和发光信号稳定的特点,可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。相对于美仑闪光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit(MA0517),本品Firefly-Glo Luciferase Reporter Assay Kit(MA0519)具有以下优点:采用了一种全新的萤光素酶检测底物,提高了发光信号的稳定性,近乎2小时的信号半衰期为实验设计提供了更大的灵活性;采用加样-混匀-检测的操作方法,无需依赖自动进样器,并且无需弃培养液、离心等步骤,简化了实验流程;本试剂盒组分做了大量优化,与传统闪光型产品相比,无明显刺激性气味。Firefly-Glo萤光素酶报告基因检测试剂盒可用于多种常用细胞培养液:RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等,其半衰期均为2小时左右(22℃),满足绝大多数高通量实验需求。


使用说明:

1.自备材料

 PBS;多道排枪;白色不透光细胞培养板;化学发光仪或酶标仪。

2.检测前准备

1)首次使用时将Firefly-Glo Luciferase Reaction Buffer一次性全部倒入Firefly-Glo Luciferase Substrate瓶中,充分混匀后,按使用需求进行分装,建议-70℃长期保存或者短期存放于-20℃不超过一个月,并尽快使用。

2)每次实验前将分装后冻存的检测试剂平衡至室温。

3.操作方法

1)从细胞培养箱中取出细胞培养板,放置5-15min,恢复至室温。

注:使用白色不透光的细胞培养板,减少孔间的信号干扰。

2)加入检测溶液

使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的Firefly-Glo Luciferase Reaction Buffer,加样体积与细胞培养液体积相同。例如,96孔板通常加入80-100ul培养液,相应加入80ul-100ul检测溶液;384孔板通常加入20-30ul培养液,相应加入20-30ul检测溶液。

3)振荡混匀

为了使得细胞裂解充分,建议将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上,室温条件下,采用中高速振板5-10min。

注:建议振板混匀时间为5-10min,可根据细胞量进行适当调整,确保细胞充分裂解,得到稳定的发光检测结果。

4)检测

振板混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测Firefly Luciferase报告基因活性。

注:为得到最佳检测结果,请在加入检测试剂后2小时内完成检测。


 



注意事项:

1、检测仪器选择:能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测,但是针对相同的样品,不同检测器本底信号值和测量值均可能不同;且对于同一样本检测,不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰,推荐使用不透明白色细胞培养板。

2、由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响,所以应确保同组内不同样本检测条件一致。

3、酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。

4、为保证萤光素酶检测试剂稳定性,适量分装后建议-70℃长期避光保存或者短期存放于-20℃不超过一个月,并尽快使用,尽量避免多次反复冻融。

5、如需同时检测多个细胞培养板,请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致,再进行数据读取,以此获得最佳的检测结果。


保存条件:

全新试剂盒-20℃保存,一年有效;

溶解分装后的Firefly-Glo Luciferase Substrate于-70℃避光保存一年,或-20℃短期保存不超过一个月。


运输条件:2~8℃运输


数据展示


 


图1. Firefly-Glo发光体系在光强、稳定性以及线性效果对比P进口品牌。(A) 萤光素酶浓度-光强-时间标曲三维图。在一定浓度范围内,标准曲线统计显示为一个截面,说明meilunbio的Firefly-Glo发光体系在2h以内任一时刻的线性良好。(B) meilunbio的Firefly-Glo萤光素酶报告基因检测试剂盒对比P 进口公司最新版本,在绝对光强和稳定性方面非常接近。(C) 单一时刻光强-Firefly萤光素酶浓度标曲线性良好(R2=0.9994)。



图2. Firefly-Glo发光体系在不同培养基发光及半衰期验证。美仑Firefly-Glo发光体系在常用培养基如:DMEM、RPMI1640、DMEM/F12、MEMα、F12等都可以正常发光;萤光半衰期在100-120min 左右,与P进口品牌官方公布的数据相当(此处未完全展示,可参考P公司官方网页)。


 


图3. 酚红浓度-Firefly Glo 萤光稳定性验证。配制含有浓度梯度的PBS溶液,各自加入等量的萤火虫萤光素酶并验证Firefly-Glo 的发光稳定性。由图可知,meilunbio® Firefly-Glo 对比P进口品牌具有更好的酚红耐受能力。



图4. (A)细胞浓度梯度光强稳定性和(B)细胞浓度-光强标曲示例。在细胞培养基环境中,原位追踪检测Firefly Luciferase发光情况。由图可知,萤光稳定性和绝对光强与P进口品牌差异不大;而且,单一时刻光强-细胞数标曲线性良好(R2=0.9993)。



图5. 293T细胞中TNFα 浓度梯度诱导NF-κB通路检测效果美仑对比P进口品牌。(A) 归一化处理后,由图可知TNFα浓度梯度在2h以内各个时刻均保持着相对一致的诱导关系;并且随着时间进行,这种诱导关系并无明显变化。(B) 单一时刻TNFα 浓度梯度诱导NF-κB通路效果美仑对比P进口品牌,结果无显著性差异。


我司所售出产品仅供于科研研究用途(非临床科研研究),每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款。

英文名字:Firefly-Glo Luciferase Reporter Assay Kit
质量标准:Meilunbio
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摩尔浓度计算器 (本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系)
摩尔浓度计算公式:质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
质量(g
=
浓度 (mol/L)
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