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ONPG;邻硝基苯-β-D-半乳糖苷
ONPG;邻硝基苯-β-D-半乳糖苷
ONPG;邻硝基苯-β-D-半乳糖苷
商品货号:MB3189
CAS 号:369-07-3
英文名字:2-Nitrophenyl β-D-galactopyranoside
质量标准:>99%,BR
分子式:C12H15NO8
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    ONPG;邻硝基苯-β-D-半乳糖苷;2-Nitrophenyl β-D-galactopyranoside  
    分子式:C12H15NO8   分子量:301.25

    相关谱图:

    HNMR

    简介: ONPG 是一种比色和分光光度计底物,用于检测 β-半乳糖苷酶活性。
    别名:ONPG;邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷;o-Nitrophenyl β-D-galactopyranoside ONPG
    物理性状及指标:
    外观:……………………类白色结晶性粉末
    熔点:……………………180-190℃(lit.)(dec.)
    溶解性:…………………溶于水
    密度:……………………1.60 g/cm3 (预测)
    含量:……………………>99%

    储存条件:2-8 ℃,避光防潮密闭干燥

    生物活性
    β-galactosidase,将乳糖分解成半乳糖和葡萄糖。β-Galactosidase乳糖不具体,并将其作为一个简单的半乳糖苷。2-Nitrophenylβ-D-galactopyranoside水解导致半乳糖的释放和一个黄色的发色的化合物。试验底物不依赖诱导或本构渗透酶进入细胞,因此反应迅速,24小时内发生。
    该酶对ONPG具有较高的水解能力(100%),对天然底物乳糖具有中等活性(25.7%)。然而,该酶对所有其它显色硝基苯基类似物的水解能力很弱,表明Gal308是具有窄底物特异性的β-半乳糖苷酶。为了研究重组酶的动力学参数,测定了Gal308对ONPG和乳糖的Michaelis-Menten常数(Km)、周转数(kcat)和催化效率(kcat/Km)。Kcat和Km值ONPG分别为464.7±7.8s-1和2.7±0.3mM,乳糖分别为264.2±2.1s-1和7.1±0.8mM。ONPG(172.1s-1mM-1)的kcat/Km值比乳糖(37.2s-1mM-1)高4.6倍,表明Gal308对ONPG的催化效率明显高于乳糖。

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    用途及描述:科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面,严禁用于人体。 用于检测β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性,是β-半乳糖苷酶的显色底物。经β-半乳糖苷酶催化后可产生黄色产物,在410-420nm波长可以检测吸光度

    经典实验操作(来源于公开文献,仅供参考)
    激酶实验
    本实验采用ONPG和乳糖两种底物测定β-半乳糖苷酶活性。通过跟踪ONPG释放出的邻硝基苯酚的量来测定ONPG的β-半乳糖苷酶活性。反应混合物由100μL的酶溶液和400μL的ONPG溶液(在pH 6.8的100mM Tris-HCl缓冲液中为2.5g/L)组成。在78℃孵育15分钟后,加入等体积的1M Na2CO3终止反应。通过测定A405,定量测定释放的邻硝基苯酚。一个活性单位是在测定条件下每分钟产生1μmol邻硝基苯酚所需的酶量。特异性活性以每毫克蛋白质单位表示。在含有100μL酶溶液和5%乳糖的同一缓冲液中测定对乳糖的活性,通过沸腾10分钟停止反应,并使用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶测定试剂盒测定葡萄糖的浓度。通过测定A492对释放的葡萄糖进行定量测定。一个酶活性单位被定义为每分钟释放1μmol葡萄糖所需的酶活性量。
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    我司所售出产品仅供于科研研究用途,每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款。

    http://www.meilune.com/article.php?id=374

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