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PSI(蛋白酶体抑制剂);Proteasome Inhibitor 1
PSI(蛋白酶体抑制剂);Proteasome Inhibitor 1
PSI(蛋白酶体抑制剂);Proteasome Inhibitor 1
商品货号:MB2634
CAS 号:158442-41-2
英文名字:Z-Ile-Glu(O-t-butyl)-Ala-Leucinal
质量标准:>95%
分子式:C32H50N4O8
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    PSI(蛋白酶体抑制剂);Proteasome Inhibitor 1;Z-Ile-Glu(O-t-butyl)-Ala-Leucinal

    分子式:C32H50N4O8    分子量:618.76
    物理性状及指标:
    外观:……………………白色固体
    溶解性:…………………>30.6mg/ml in DMSO
    纯度:……………………>95%
    氨基酸序列:……………Z-Ile-Glu(O-t-butyl)-Ala-Leucinal

    生物活性及研究进展:

    靶点:Ubiquitination、Proteasome

    据报道,ZIE(OtBu)AL-CHO (PSI)可抑制各种细胞类型中蛋白酶体的活性。蛋白酶体抑制剂今年来常用于制备PD动物模型,其主要通过抑制USP的功能,在细胞上发生特异性影响,使蛋白质代谢发生异常,导致蛋白质的异常聚焦。UPS是细胞内重要的非溶酶体蛋白降解系统,越来越多的证据表明, 在散发性PD中存在UPS功能异常, 引起家族性PD的asynuclein 、parkin 、和UCH-I , l 的基因突变也与UPS功能异常密切相关, 因此UPS功能异常可能是不同类型PD发病的一个共同途径。迄今为止, UPS功能异常导致PD发病的通路仍不清楚。有研究表明蛋白酶体抑制剂PSI可诱导PD模型中蛋白的差异表达。最常见的药物有天然蛋白酶抑制因子,人工合成的蛋白酶抑制剂,蛋白酶体抑制剂乳胞素。

    比如:PSI(蛋白酶体抑制剂)(MB2634);Lactacystin/乳胞素(MB5926);epoxomycin,Epox(MB3678);MG132(MB5137)等。

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    各类蛋白酶体抑制剂的比较

    肽醛[PSI (Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-al)]抑制蛋白酶体的活性比calpain 高10倍,而比MG132活性弱。由于MG132、PSI、和ALLN 除了抑制蛋白酶体外,还可抑制钙蛋白酶(calpains)和各种溶酶体组织蛋白酶(cathepsins)。在细胞培养物中使用 这些抑制剂时要设置对照实验,以确认观察到的效应是由于对蛋白酶体的抑制。首先,可使用阻断细胞内半胱氨酸蛋白酶,而不抑制蛋白酶体的抑制剂,如钙蛋白酶抑制剂E-64,和溶酶体水解的抑制剂(如弱碱chloroquine 和E-64)。在酵母中,消化液泡中主要含丝氨酸蛋白酶,而非半胱氨酸蛋白酶,phenylmethylsulfonyl £uoride 可用于抑制这些酶,而不影响蛋白酶体。 尽管这些抑制剂都可用于抑制蛋白酶体,但由于MG132价格低、且快速可逆,仍旧是细胞培养或组织中研究蛋白酶体参与通路的首选。MG132作为最有效的和选择性的市售醛类, 优于ALLN或甚至PSI 而被优先选择。而最少选择性的抑制剂ALLN,由于其能够抑制哺乳动物细胞中大部分主要的蛋白酶,可能是用于阻止不需要的蛋白水解的最好工具,比如从哺乳动物细胞中进行蛋白分离时。

    用途及描述:科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面,严禁用于人体。PSI蛋白酶体抑制剂,该药物制作帕金森病(PD)细胞模型的建立。作用原理是通过抑制蛋白酶体的chymotrypsinas活性。导致多巴胺能细胞死亡。防止NF- B对TNF-和okadaic酸(Cat)的激活。通过抑制IκB-α退化。也可以抑制lps激活的巨噬细胞的产生。可抑制各种细胞类型中蛋白酶体的活性。

    使用方法举例(仅供参考)

    PSI制备PD细胞模型

    PSI作用于PC12细胞24 h,细胞存活率无明显改变,细胞多数处于包涵体及凋亡出现阶段;随作用时间延长细胞发生大量死亡。因此,PSI作用于PC12细胞24 h适合研究包涵体和凋亡出现的机制,可较好地作为研究PD的细胞模型。PC12细胞蛋白酶体受抑模拟了PD 的两大病理特点,蛋白酶体功能异常可能是PD的发病因素之一,短期抑制PC12细胞的蛋白酶体功能。

    1 实验细胞: PC12细胞

    2 细胞培养和药物配制

    培养于DMEM[含10% (体积分数)的新生牛血清、10 g/L L-谷氨酰胺、100 g/mL青霉素和链霉素)中。培养环境为37℃ 、含5% (体积分数)CO₂。湿度饱和,选取对数生长期细胞做实验。蛋白酶体抑制剂PSI用DMSO配成储备液,使用时用培养液稀释。

    3 MTT法检测细胞存活率按2×10⁴/孔的密度将PC12细胞接种于96孔培养板,每组设6个复孔。每组细胞分别加入1、2.5、5、10、20μmol/L PSI和0.1%(体积分数)DMSO,孵育24、48、72 h。每孔加5 mg/mL MTT 10μL,继续培养4 h后加DMSO使甲廊l颗粒充分溶解,用酶标仪于570 nm处读取吸光度值。以仅用0.1%(体积分数)DMSO处理的细胞吸光值作阴性对照。取各孔均值按下列公式计算细胞存活率:细胞存活率一实验组吸光均值/阴性对照组吸光均值×100 。

    4 丫啶橙、溴化乙啶染色检测细胞凋亡经PSI处理细胞后,培养孔内加入丫啶橙和溴化乙啶(100μg/mL)混合液1μL,置倒置荧光显微镜下观察细胞形态并计数。

    镜下可见4种细胞形态:(1)活细胞:核染色质着绿色并呈正常结构;(2)早期凋亡细胞:核染色质着绿色但呈固缩、圆珠或斑块状;(3)晚期凋亡细胞:核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;(4)坏死细胞:核染色质着红色并呈正常结构。

    5 培养细胞的HE染色经PSI处理24 h后,将PC12细胞吹打成细胞悬液,置细胞涂片机上离心涂片,以10%(体积分数)甲醛固定后进行HE染色,置光学显微镜下观察细胞形态及结构变化。

    6 透射电镜观察PC12细胞超微结构用胰酶将PC12细胞消化后,以1000 r/min离心10 min,PBS洗2次,以30 g/L戊二醛固定,经锇酸固定、梯度脱水、包埋并超薄切片,置透射电镜下观察。

    7 统计学处理

    储存条件:-20℃,避光防潮密闭干燥。

    【注意】

    ●我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。

    ●部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

    我司所售出产品仅供于科研研究用途,每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款。
    http://www.meilune.com/article.php?id=374

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