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细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8),增强型
细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8),增强型
细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8),增强型
商品货号:MA0218
CAS 号:V
英文名字:Cell Counting Kit-8
质量标准:Meilunbio
  • 包装规格:
    规格 库存 发货时间
    100T [¥160.00]80 现货
    500T [¥500.00]77 现货
    500T*10 [¥4000.00]80 现货
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    商品信息

    质检证书(coa)

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    产品描述

    Cell Counting Kit-8(简称CCK-8),是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。
    CCK-8试剂中含有WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐)是一种类似于MTT的化合物,它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)存在条件下,可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan (参考图1),生成的Formazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析,细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。

     

    图1. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent,即电子耦合试剂)


    WST-8与以往的增殖/毒性测定试剂相比,具有明显优点(参考表1)。美仑CCK-8试剂盒具有灵敏度高、反应时间短、线性范围宽、数据可靠、重现性好等特点,可以广泛应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

    1. 增殖/毒性测定试剂的比较

    检测方法

    MTT法

    XTT法

    WST-1法

    CCK-8法

    甲瓒产物的水溶性

    差(需加有机溶剂溶解)

    检测灵敏度

    很高

    很高

    最高

    检测时间

    较长

    较短

    较短

    最短

    检测波长

    560-600nm

    420-480nm

    420-480nm

    430-490nm

    细胞毒性

    高,细胞形态完全消失

    很低,细胞形态不变

    很低,细胞形态不变

    很低,细胞形态不变

    试剂稳定性

    一般

    较差

    一般

    很好

    批量样品检测

    可以

    非常适合

    非常适合

    非常适合

    便捷程度

    一般

    便捷

    便捷

    非常便捷

    产品优势 
    • 灵敏度高,线性范围宽,数据可靠,重现性好
    • 操作简便,省时省力
    • 水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
    • 无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
    • 为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
    • 适合于高通量药物筛选
    • 检测效果与国外品牌相媲美

    对照实验:采用某国外品牌CCK-8试剂盒作为对照,在相同的实验条件下,检测细胞的活力。 
    "检测结果:如图2所示,美仑细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)测得的吸光值/细胞数目比值更大,灵敏度更高,与某国外品牌CCK-8试剂盒相比实验差异极小(在5%左右,几乎相当于不同批次之间的差异)。


    图2. 使用美仑CCK-8与其他国外品牌CCK-8灵敏度的比较

    保存条件

    4℃避光保存,一年有效。-20℃可以储藏更久,但反复冻融会增加背景值,干扰实验测定,因此请将经常使用的试剂保存在4 ℃。
     

    操作方法

    请参考说明书。
     

    注意事项
    • 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
    •  CCK-8 反应时间的确定:一般情况下,白细胞显色比较困难,因此需要增加细胞数量和延长 CCK-8 反应时间。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色,因此悬浮细胞在加入 CCK-8 培养0.5-4小时后,可先从培养箱取出,目测或用酶标仪测定显色程度,若显色困难可以继续培养数小时后再确定。对于贴壁细胞,CCK-8 的培养时间一般为 0.5-4 小时,在培养 20 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度。
    • 每孔接种细胞数:当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔 (100 μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500个/孔 (100 μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
    • 设定空白对照:在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。
    • 影响CCK-8测定的物质:由于CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应,所以如果待测体系中存在氧化还原物质则可能会干扰检测结果,还原性物质会使吸光度增加,氧化性物质会使吸光度减小,因此应需设法去除这些物质的影响。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响,培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除只含有培养基的对照孔中本底吸光度而消除,因此不会对检测结果造成影响。
    • 测定波长:如果样品为高浑浊度的细胞悬液,建议采用双波长进行测定,检测波长450nm,参比波长600-650nm。如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片,但是450nm检测灵敏度最高。
    • 当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。
    • 如果细胞培养时间较长,培养基颜色发生变化,应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。
    • 为了您的安全和健康,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
    备注:所有报价均已含国内快递费及发票费用。库存情况可能有所变动,请与我们销售人员确认为准,价格情况请直接联系我们销售人员。

     

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