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PF04447943
PF04447943
PF04447943
商品货号:MB3418
CAS 号:1082744-20-4
英文名字:PF-04447943
质量标准:>95%,PDE9选择性抑制剂
分子式:C20H25N7O2
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    商品信息

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    PF-04447943;PF04447943
    分子式:C20H25N7O2  分子量:395.46

    简介: PF-04447943 是一种有效的人重组 PDE9A 抑制剂,IC50 为 12 nM,比作用于其他PDE家族成员选择性高 78 倍 (IC50>1000 nM)。
    别名:4H-Pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-one, 1,5-dihydro-6-[(3S,4S)-4-methyl-1-(2-pyrimidinylmethyl)-3- pyrrolidinyl]-1-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)-
    物理性状及指标:
    外观:………………浅黄色至黄色粉末
    溶解性:……………DMSO: ≥ 54.6 mg/mL
    含量:………………>95%

    储存条件: -20℃,避光防潮密闭干燥
    生物活性

    产品描述

    PF-04447943 是一种有效的人重组PDE9A 抑制剂,IC50 为 12 nM,比作用于其他PDE家族成员选择性高 78 倍 (IC50>1000 nM)。

    靶点

    IC50: 12 nM (PDE9A)

    体内研究

    在无细胞试验中使用重组人,恒河猴和大鼠PDE9A2,PF-04447943显示具有2.8±0.26,4.5±0.13和18.1±1.9nM的Ki(分别为n = 4,11和9)。 发现PF-04447943对其他PDE酶具有高选择性(PDE1,Ki = 8600±2121 nM,n = 5; PDE2A3,Ki> 99,000 nM; PDE3A,Ki> 50,000 nM; PDE4A,Ki> 29,000 nM; PDE5A, Ki = 14,980±5025nM,n = 5; PDE6C,Ki = 5324±2612nM,n = 4; PDE7A2,Ki> 75,000nM; PDE8A,Ki> 50,000nM; PDE10,Ki> 51,250±20,056nM,n = 4 ; PDE11,Ki> 80,000nM)并且在~60种其他受体/酶中没有其他显着活性。 在表达恒河猴PDE9A2的HEK全细胞中,PF-04447943抑制ANP(0.3μM)刺激的cGMP,IC50为375±36.9nM(n = 16)。

    体外研究

    基于i.v.和p.o.在大鼠中用PF-04447943进行给药,药代动力学研究表明Tmax为0.3小时,T1 / 2为4.9小时,Cl为21.7mL / min / kg,口服生物利用度为47%。在大鼠口服给药30分钟后(1-30mg / kg),PF-04447943浓度在血液,脑和脑脊液(CSF)中剂量依赖性地增加。大脑:给药后30分钟的血浆暴露比率范围从1mg / kg剂量的0.13到30mg / kg剂量的0.33。脑脊液水平约为大脑水平的50%。在小鼠中,PF-04447943(3,10,30mg / kg p.o.)剂量依赖性地增加PF-04447943的血浆和脑浓度,而脑与血浆的比率范围为0.26至0.7,尽管这不完全是剂量依赖性的。在30mg / kg剂量下,CSF cGMP水平以剂量依赖性方式从基础水平3pmol / mL增加至13.3pmol / mL(3.5倍)。 CSF cGMP水平也以剂量依赖性方式从载体处理动物的基础水平3pmol / mL增加至30mg / kg剂量的13.3pmol / mL(3.5倍)。在所有测试剂量下CSF cGMP水平升高,最大效果比对照组高30mg / kg增加3.5倍。

    用途及描述 :科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面,严禁用于人体。PF-04447943是PDE9的选择性抑制剂,此外,PF-04447943(100 nM)显著促进海马脑片中由弱强直刺激诱发的LTP。
    储液配置

    1 mg

    5 mg

    10 mg

    1 mM

    2.5287 mL

    12.6435 mL

    25.2870 mL

    5 mM

    0.5057 mL

    2.5287 mL

    5.0574 mL

    10 mM

    0.2529 mL

    1.2644 mL

    2.5287 mL

    经典实验操作(仅供参考)


    激酶实验

    进行PDE酶测定。
    PDE1A-C、PDE2A、PDE3A/B、PDE4A-D、PDE7A/B、PDE8A/B、PDE9A、PDE10A和PDE11均由全长重组克隆生成。
    PDE5是从人血小板中分离出来的,PDE6是从牛视网膜中分离出来的。
    PDE活性是通过闪烁接近试验(SPA)来测量的。
    通过测定每种酶在底物浓度为1/3 Km的情况下固定数量的酶和不同的抑制剂浓度来研究PDE抑制剂的效果,使IC50值与Ki值接近。
    PF-4447943在100% DMSO中溶解,在15% DMSO水中稀释至所需浓度。
    酶库均缓慢解冻,稀释于含有50mm hcl(常温pH 7.5)和1.3 mM MgCl2的分析缓冲液中。
    此外,PDE1分析缓冲区包含2.8 mM CaCl2。
    PDE1C检测还要求在最终检测浓度为100单位/mL时添加激活剂钙调蛋白。
    在含有试验药物和放射配体的384孔板(PDE1、PDE2、PDE5、PDE6、PDE9、PDE10、PDE11和20nm的PDE3、PDE4、PDE7和PDE8的50nm cGMP [3H]cGMP [3H]cAMP [3H]cAMP [3H]cAMP [3H]cAMP [3H]cAMP [3H]cAMP [3H]cAMP]。
    在室温下孵育30分钟(PDE5和PDE6孵育60分钟)。
    在最终浓度为0.2 mg/阱的条件下,加入磷酸二酯酶SPA珠,终止反应。
    PDE9需要额外添加高浓度(10μM)的一个强有力的PDE9抑制剂珠子之前停止反应完全。
    通过测量[3H]cGMP或[3H]cAMP radioligand产生的[3H]5 -GMP或[3H]5 -AMP的量来评估测试化合物的活性。
    与SPA珠子结合的[3H]5 -GMP或[3H]5 -AMP的水平是通过加入珠子后10小时微测试仪Trilux计数器中分析板的paralux计数来确定的。
    非特异性结合是由放射性配体结合在一个有效的PDE抑制剂的饱和浓度的存在。
    通过浓度响应的非线性回归(曲线拟合)计算出每个测试化合物的IC50值(浓度为50%时,特异性结合抑制发生)。

    细胞实验

    PF-04447943溶解在DMSO中储存,使用前用适当的介质稀释。
    恒河PDE9A2构造subcloned成pcDNA3.3威尼斯平底渔船向量和HEK 293个细胞,稳定转染持续表达恒河PDE9A2 hNPR1,孵化与pf - 04447943(30μM 1.5 nM)分析媒体在10000细胞/密度,为30分钟37°C。环磷鸟苷形成孵化刺激下,0.3μM ANP(心房利钠肽),另一个30分钟37°C。孵育后,细胞在室温下用抗体/裂解缓冲液和ED试剂裂解1小时。随后在室温下用EA试剂孵育30 min,然后在室温下用底物试剂孵育1 h,通过测量昂科威微板发光计上的发光量来测定cGMP浓度。最大抑制细胞内活动(100%)为基础分析确定使用30μM pf - 04447943和0% DMSO定义的活动控制。PF-04447943是四倍滴定,在10点滴定。用最大抑制值计算抑制率,用Prism软件从浓度响应曲线计算IC50值。

    动物实验

    PF-04447943配制在20%羟丙基-β-环糊精中
    小鼠和大鼠
    对于小鼠研究,给予雄性C57Bl / 6J小鼠PF-04447943(3,10,30mg / kg口服)。对于大鼠研究,给予PF-04447943 10mg / kg i.v.的大鼠(菌株,重量范围和供体,如下面的新物体识别研究中所述)。和p.o.在给药后的不同时间,用异氟烷麻醉动物;通过心脏穿刺抽取血样并置于冰上的EDTA管中。分离血浆并在-70℃冷冻直至测定药物浓度。将动物断头,取出脑,然后在每克组织中在3mL水中匀浆,并以13,500g离心15分钟。使用与SCIEX API4000 Q-Trap质谱仪结合的Acquity UPLC系统进行样品分析。使用在60℃下操作的AcquityUPLC®BEHC18柱(1.7μm粒径,50×2.1mm内径)分析2μL样品提取物。流速为0.7 mL / min。使用由溶剂A(20/80甲醇/水,10mM乙酸铵)和溶剂B(在甲醇中的10mM乙酸铵和0.6mL / L 10%乙酸)组成的梯度流动相。每个样品的总运行时间为1.2分钟。 PF-04447943和内标分别在0.61和0.67分钟洗脱。在从m / z 396.2到203.1和m / z 477.3到266.2的转变处以正离子模式监测PF-04447943和内标。使用Analyst 1.4基于重复的标准曲线进行定量。

    【注意
    我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。

    部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

    我司所售出产品仅供于科研研究用途,每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款。

    http://www.meilune.com/article.php?id=374

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