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NVP-BSK805 2HCl
NVP-BSK805 2HCl
NVP-BSK805 2HCl
商品货号:MB3931
CAS 号:1092499-93-8 (free base)
英文名字:NVP-BSK805 2HCl
质量标准:>98%,JAK2抑制剂
分子式:C27H28F2N6O.2HCl
  • 包装规格:
    规格 库存 发货时间
    5MG [¥1300.00]15 现货,一周内发货
    10MG [¥2300.00]15 现货,一周内发货
    50MG [¥6300.00]15 现货,一周内发货
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    NVP-BSK805 2HCl     
    分子式:C27H28F2N6O.2HCl   分子量:563.47

    简介: NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,比作用于JAK1, JAK3和TYK2选择性高20倍以上。
    别名:BSK805 dihydrochloride; NVP-BSK 805 dihydrochloride;8-[3,5-Difluoro-4-(4-morpholinylmethyl)phenyl]-2-[1-(4-piperidinyl)-1H-pyrazol-4-yl]quinoxaline
    物理性状及指标:
    外观:………………白色至类白色固体
    溶解性:……………DMSO:113 mg/mL (200.54 mM);Water:3 mg/mL (5.32 mM);Ethanol:15 mg/mL (26.62 mM)
    含量:………………>98%

    储存条件: -20℃,避光防潮密闭干燥
    生物活性

    产品描述

    NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,IC50为0.5 nM,比作用于JAK1, JAK3和TYK2选择性高20倍以上。

    靶点

    JAK2
    (Cell-free assay)

    TYK2
    (Cell-free assay)

    JAK3
    (Cell-free assay)

    JAK1
    (Cell-free assay)

    ~0.5 nM

    10.76 nM

    18.68 nM

    31.63 nM

    体外研究

    NVP-BSK805是JAK2强有效的抑制剂,且对JAK2的特异性很好,其对JAK2的抑制效果比对JAK1, JAK3和TYK2要强20倍。0.5 nM 的NVP-BSK805对全长JAK2V617F和野生型JAK2酶产生一半的最大抑制效果。NVP-BSK805阻断JAK2V617F细胞(Ba/F3)的生长,且诱导细胞凋亡,其GI50在<100 nM的浓度。STAT5磷酸化作用是依赖JAK2的基本的磷酸化作用,在JAK2 V617F突变的细胞中,大于等于100 nM的 NVP-BSK805像MB-02一样能显著抑制STAT5的磷酸化作用。分别用150 nM和1µM的NVP-BSK805孵育SET-2细胞,分别能抑制75%和95%的细胞生长,且在这两个浓度下培养24, 48和72小时,发现会引起浓度和时间依赖的细胞凋亡。可以检测裂开的PARP、Bcl-xL表达的减少和急剧增加的DNA含量少于2N的细胞数量,通过检测这些确定结果。NVP-BSK805引起的细胞凋亡是需要通过激活凋亡蛋白级联反应来实现的,而当在SET-2和MB-02细胞中抑制细胞凋亡蛋白酶caspase则可以抑制这种NVP-BSK805引起的细胞凋亡。在JAK2V617F细胞, SET-2和MB-02细胞中,NVP-BSK805能调节Bim的翻译后修饰和Mcl-1的水平。

    体内研究

    口服NVP-BSK805生物药的利用效率在小鼠体内的实验估计为45%,在大鼠实验中估计为50%。给携带Ba/F3 JAK2V617F细胞的小鼠模型口服150 mg/kg的NVP-BSK805能抑制STAT5的磷酸化,脾肿大及白血病细胞的扩散。给BALB/c小鼠口服25, 50和100 mg/kg剂量的NVP-BSK805,能抑制rhEpo诱导的STAT5磷酸化反应和rhEpo调节的红细胞增多和脾肿大。

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    用途及描述 :科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面,严禁用于人体。NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,本品可用于相关领域的科研实验。
    储液配置

    1 mg

    5 mg

    10 mg

    1 mM

    1.7747 mL

    8.8736 mL

    17.7472 mL

    5 mM

    0.3549 mL

    1.7747 mL

    3.5494 mL

    10 mM

    0.1775 mL

    0.8874 mL

    1.7747 mL

    50 mM

    0.0355 mL

    0.1775 mL

    0.3549 mL

    经典实验操作(仅供参考)

    激酶实验:

    酶活性分析:
    构建含有人的JAK2激酶结构域(840-1132位氨基酸)的质粒pAcG2TtevJAK2。分别设计构建了JAK3 (813-1124), TYK2 (888-1187)和JAK1(866-1154)的质粒。通过产品手册(BD Biosciences Pharmingen)构建含有BD BaculoGoldTM Bright线性DNA的融合杆状病毒,空斑实验以及单一斑块病毒扩增实验。用100 mL加了青霉素/链霉素(Sigma)的 ExCell420培养基(JRH Biosciences Ltd)在27 ℃培养Sf9细胞48小时,用于表达Janus激酶结构域。在悬浮培养的细胞浓度在1 × 106时进行感染,用感染病毒后可溶性蛋白的产量优化每个病毒的感染复数(MOI)。分别在MOI为1和0.5的时候表达人的JAK2的激酶结构域和JAK1, JAK3和TYK2的激酶结构域。27 ℃下培养48小时表达JAK2,而JAK1, JAK3和TYK2则需48或72小时表达。感染后48小时或72小时后,将100 mL表达培养基用3000 ×g离心5分钟收集细胞,用12 mL裂解缓冲液裂解细胞,缓冲液成分为50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM原钒酸钠, 1 % Triton X-100, 10 % 甘油, 1× 不含EDTA的完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche Diagnostics)和12.5 U/mL Benzonase。4℃孵育30分钟,14,000 × g离心45分钟分离颗粒性不可溶物质。然后在4 ℃下用GST标签亲和纯化蛋白激酶结构域。将之前离心所得的上清与0.2 mL含有50 %的谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B的悬浮液在4 ℃下孵育2小时,然后用1 mL含有50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1 mM DTT和10 %甘油的缓冲液洗5次。用0.25 mL的洗脱缓冲液(50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1mM DTT, 10 % 甘油, 10 mM还原性L-谷胱甘肽)洗脱结合到胶上的蛋白,分5次洗脱,每次孵育10分钟。用Amicon Ultra-4离心超滤管浓缩洗脱液到五分之一的体积。加入终浓度0.1 %的Brij35后,将蛋白分成小份,置于-80℃速冻保存,在这种储存条件下其激酶活性能保持至少6个月。在含有0.1 μM [γ33P]-ATP, 1 mM MnCl2, 5 mM MgCl2, 30 μM合成的多肽底物EQEDEPEGDYFEWLE, 1 mM DTT, 1 % DMSO, 50 μg/mL BSA, 0.01 % Brij35和50 mM Tris-HCl pH 7.5的缓冲体系中加入JAK激酶结构域作为酶,室温孵育30分钟。对于所有的蛋白ATP的浓度都低于其Km值。用XLfit® (型号205)的逻辑斯谛方程和全局拟合功能对曲线进行非线性回归拟合。像激酶实验的条件一样全长野生型JAK2及其突变体V617F的表达及鉴定,实验方法在其他地方已经介绍了。用内源激酶通路分析NVP-BSK805的激酶选择性实验,在Caliper实验中,在电场中当多肽底物被磷酸化后会有不同的迁移速度,以此来检测激酶实验。多肽带有荧光标签,可以在毛细管系统中用于检测、离子交换及定量。用LC3000仪器(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA)对多肽的荧光进行定量。激酶实验中激酶的活性可以通过检测剩余的ATP的数量来定量。LanthaScreenTM TR-FRET激酶实验中,铽元素当做镧系元素螯合物融合了抗磷酸化底物的抗体。

    细胞实验:

    • Cell lines: Ba/F3细胞
    • Concentrations: 100 nM
    • Incubation Time: 72小时
    • Method: 可以通过比色分析试剂盒WST-1 (Roche Diagnostics GmbH)来检测细胞存活率,用于分析对比用8点浓度范围的药物培养72小时后细胞的存活情况以及用DMSO处理细胞后产生相关的细胞增殖变化情况,这样可以检测JAK2抑制剂抑制细胞增殖的能力。重复三次后,计算平均值,XLfit 4 软件绘图,可以得到抑制最大生长一半(GI50)的数值。

    动物实验:

    • Animal Models: RhEpo诱导的红血球增多症的雌性BALB/c小鼠
    • Formulation: NVP-BSK805要新鲜配制,配制在混合液MP/PEG300/Solutol HS15 (5/80/15%)中.
    • Dosages: 50, 75和100 mg/kg
    • Administration: 每天口服一次

    【注意
    我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。
    部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

    备注:库存情况可能有所变动,请与我们销售人员确认为准,价格情况请直接联系我们销售人员。
    我司所售出产品仅供于科研研究用途,每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款。
    http://www.meilune.com/article.php?id=374

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