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鱼和熊掌可兼得!美仑精品推荐:Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)
2020-04-10  来源:美仑生物

 

Meilunbio®致力于为中国科学家在生命科学研究领域提供最可靠的工具材料及技术手段,我们专注于基础科研层面的细胞培养及检测,蛋白定量提取及免疫印迹等细分领域,愿为中国的医学、药学、生物学等产业奠定坚实的研究基础。

Meilunbio®旗下再添重磅新品,Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型),产品货号MA0079

测定蛋白浓度对大多数通过生化方法来提取、分离和分析蛋白的实验和工作流程而言,准确定量总蛋白质浓度都是关键步骤。通常,蛋白定量方法的选择基于多个因素,包括与待分析样品缓冲液成分的兼容性。我们针对采用荧光计、光谱仪和酶标仪进行荧光法或比色法蛋白定量检测的应用,提供了各种检测试剂、试剂盒和标准品。但是针对常见的BCA法和Bradford法,各自存在一些应用限制。

BCA试剂盒线性好,兼容去垢剂,但是操作很麻烦,不兼容还原剂,

Bradford试剂盒操作简单,兼容还原剂,但是不兼容去垢剂,不能使用常规各种裂解液(基本都含去垢剂),

都想用含去垢剂的裂解液,因为效果好,但是又不想操作麻烦,或者碰巧我的前期实验中会引入还原剂如DTT(很常见啊)或者铜离子螯合剂如EDTA(很常见啊)

怎么办??鱼和熊掌不可兼得,来美仑,鱼和熊掌可以兼得,美仑新品去垢剂兼容型Bradford蛋白浓度测定试剂盒;让您鱼和熊掌都可兼得

 

货号

品名

规格

原价

MA0079

Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)

800T

380

(活动规则见底部)

 

 

BCA 法和 Lowry 法定量  

Bradford法和染料法定量 

荧光法定量

线性工作范围  

常规方案 20–2,000 µg/mL
增强方案 0.5–40 µg/mL

常规方案 100-1,500 µg/mL
增强方案 1-25 µg/mL

10 ng/mL 至 150 µg/mL
50 µg/mL 至 5 mg/mL

检测原理

碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。

在试剂的酸性环境中,蛋白和考马斯染料结合。这导致染料的最大吸收发生位移,从红棕色形式(最大吸收峰 465nm)转化为蓝色形式(最大吸收峰 610nm)。染料的两种形式在 595nm 处差异最大,因此 595nm 是测定考马斯染料-蛋白复合物的蓝色的最佳波长。

不同的检测机理取决于具体的检测方法,但通常检测试剂在结合蛋白之前是不发荧光的

优点

· 兼容大多数去垢剂——即使样品中去垢剂浓度高达 5%

· 线性反应曲线(R2 > 0.95)

· 该方法的蛋白质间差异性小于考马斯法(Bradford 法)

· 所有蛋白质定量方法中最快速最简单 

· 室温下进行

· 与大多数盐离子、溶剂、缓冲剂、硫醇、还原性物质和金属螯合剂兼容

· 出色的灵敏度,定量所需蛋白质样品的量更少

· 时间不是关键因素,因此该分析方法可以适应高通量应用中的自动化处理

· 蛋白间一致性好

缺点

· 在 BCA法中,能还原铜离子的物质也能造成显色,从而影响蛋白定量的准确性。

· 与铜离子螯合的试剂,DTT 等常见还原剂和特定的单个氨基酸也会在 BCA 检测中显色(半胱氨酸或胱氨酸、酪氨酸和色氨酸)

· 使用传统 BCA 法获得最佳灵敏度所需的时间和孵育温度(37°C 或 60°C)

· 与通常用于溶解膜蛋白的高浓度去垢剂不兼容

· 与基于铜的测定法相比,蛋白质之间的差异性较大

 

需要专用设备或具有荧光功能的酶标仪

 

传统常见的检测试剂盒及优缺点比较如下

总结下来,

BCA试剂盒

优点:线性好,兼容去垢剂,可以适用于大部分类似RIPA,NP-40等各种裂解液,

缺点:操作步骤繁琐,需要做标准曲线,时间长,不兼容DTT,巯基乙醇等还原剂、金属螯合剂

Bradford法试剂盒

优点:操作步骤简单,时间短,兼容DDT,巯基乙醇等还原剂,金属螯合剂等。

缺点:非线性,不兼容去垢剂,不适合大部分类似RIPA,NP-40等常规裂解液。

基于此,美仑推出Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)

优点:完美结合以上俩种试剂盒的优点,成功避开其缺点。可适用于常规含去垢剂的裂解液获得的蛋白样品测定,兼容各类还原剂,同时具备线性好,操作快的优点。

 

产品简介

Bradford蛋白浓度测定方法,是常用的经典蛋白浓度检测方法,在酸性条件下,考马斯亮蓝G250染料能与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸迅速结合,可通过检测溶液595nm处吸光值,计算蛋白质浓度,吸光值与蛋白质浓度在一定范围内有较好的线性关系。经典Bradford法与BCA法相比,可以兼容更高浓度的还原剂,并且检测速度极快,但却无法兼容蛋白提取时常用的去垢剂,而本试剂盒在保留Bradford法原有优点的同时,能够兼容各种常用去垢剂。

本试剂盒Bradford检测试剂溶液呈绿色,在与蛋白质结合后变为蓝色,颜色随蛋白浓度增加而逐渐加深。本试剂盒在测定蛋白质浓度时,可以兼容浓度1% SDS、1% NP-40、1% Triton X-100、1% Brij35和1% Tween 20等多种去垢剂,而且兼容我公司现有的所有蛋白裂解液。本试剂盒经过精心优化,可在上述去垢剂存在条件下,蛋白质样品或者标准品BSA浓度在0.1-0.5mg/ml范围内,标准曲线R2值可在0.995以上。

 

产品优势

 

兼容性好,可兼容常用去垢剂和蛋白裂解液

结果稳定,1小时内都可以对进行检测

快速检测,5分钟即可完成蛋白定量时间

结果准确,线性相关性好,斜率高

 

实验数据

 

图1. 上图是在去垢剂和蛋白裂解液存在时,蛋白标准曲线的实际检测结果。线性良好标准曲线R2值可在0.995以上。

 

 

 

图2.上图是RIPA强蛋白裂解液稀释蛋白标准溶液时,每隔5min检测吸光值结果。结果表明本产品在1小时内的吸光值变化很小。

 

保存条件

 4℃保存,一年有效。标准蛋白溶液BSA长期不用可放置在-20℃保存。

 

注意事项

1. 当去垢剂浓度大于1%时,部分去垢剂和去垢剂组合仍然适用于Bradford蛋白定量试剂(去垢剂兼容型),但可能会出现斜率降低的现象,影响结果准确度。

2. 本产品长时间不用会有少量沉淀产生,在使用前请将检测试剂上下翻转混匀。

3. 本产品建议蛋白标准浓度范围是0.1-0.5mg/ml,如果因实验需要扩大蛋白标准浓度范围后出现标准曲线线性不好的现象,可将蛋白标准溶液和蛋白样品与检测试剂的体积比例改为5:300。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

操作步骤

1. 制备蛋白标准溶液

将20mg/ml的蛋白标准溶液按照下表进行稀释,注意在稀释时尽量保证蛋白标准溶液的稀释液与待检测蛋白样品的溶剂相同,在稀释时要保证每个浓度的标准蛋白溶液都充分混匀。以下表格内的体积适用于96孔酶标板测定,如使用分光光度计测定,按实际需要扩大溶液体积。

编号

稀释液体(ul)

蛋白标准溶液体积

最终浓度(mg/ml)

A

97.5

从蛋白标准溶液BSA取2.5ul

0.5

B

20

从A管取80ul

0.4

C

20

从B管取60ul

0.3

D

20

从C管取40ul

0.2

E

20

从C管取20ul

0.15

F

20

从D管取20ul

0.1

G

20

0

0

 

2. 蛋白标准和蛋白样品浓度测定

1) 取10ul上步骤已稀释好的不同浓度蛋白标准溶液依次加入到96孔酶标板中;

2) 取10ul待测蛋白样品加入到96孔酶标板中。注意如蛋白样品浓度过大,需要用同蛋白标准稀释液相同的溶液稀释蛋白样品。

3) 每孔加入300ul Bradford蛋白定量试剂(去垢剂兼容型)。用手轻弹酶标板混匀,室温放置3-5min,注意不可以使用酶标仪震板功能,防止液体洒出污染机器。

4) 设置酶标仪测定595nm的吸光值,以不含BSA的吸光值做为空白对照。

5) 以蛋白标准液的浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,注意将零点去除,得出标准曲线线性公式及R2值。

6) 按照上述步骤所得公式,根据所测得的蛋白样品吸光值,计算蛋白样品的浓度。

7) 如使用分光光度计测定,可根据实际需要扩大溶液体积,保证蛋白标准溶液和蛋白样品与Bradford蛋白定量试剂的体积比为10:300,例如,如果需要1.5ml,可取蛋白样品50ul,Bradford蛋白定量试剂1.5ml。

 

美仑相关产品推荐

货号

品名

规格

原价

MA0079

Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)

800T/盒

380

MA0081

Bradford法蛋白定量试剂盒

1000T

130

MA0082-1

BCA蛋白定量/浓度测定试剂盒

200T

150

MA0082-2

BCA蛋白定量/浓度测定试剂盒

500T

290

MA0082-3

BCA蛋白定量/浓度测定试剂盒

5000T

1430

MB9900

Western及IP细胞裂解液

100ml

170

MA0151

RIPA裂解液(强)

100ML

220

MA0152

RIPA裂解液(中)

100ML

180

MA0153

RIPA裂解液(弱)

100ML

160

MA0156

NP-40裂解液

100ML

160

MA0211

细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

50T

410

MA0171

总蛋白提取试剂盒;全蛋白提取试剂盒

100T

600

 

活动规则:

1、转发此文章到朋友圈(不要设置权限哦),终端科研用户即可免费获得 MA0079体验装 100T一份。

2、每个课题组限领5份,每个签约经销商限领20份。

3、活动时间:2020年4月10日至2020年6月30日。

 

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