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新品播报丨美仑自主研发RNAwait非冻型组织RNA保存液
2018-12-05  来源:大连美仑生物技术有限公司

用有毒试剂费劲提出来的RNA降解了,甘心么?

快速冷冻样品顺带着自己的手也冻伤了,闹心么?

RNase没抑制好导致RNA抽提失败,来气不?

 

福利来了!

RNA守护者

RNase克星

新一代RNA保存液,耀世登场

一次性解决你所有RNA抽提实验困扰

 

 

货号MA0208  100ML [¥300.00]

 

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 01 关于美仑RNAwait非冻型组织RNA保存液 

      美仑自主研发的全新RNAwait非冻型组织RNA保存液(RNAwait RNA Stabilization Solution for Tissue,简称RNAwait),是一种液态的,无毒的组织RNA保存试剂,能迅速渗入组织抑制RNAase,稳定并保护组织样品中的RNA。本产品适用于普通新鲜组织或细胞样品中RNA的稳定和保存,更加适合样品收集后不能够立即进行RNA抽提(包括miRNA等小RNA)的情况,特别适用于野外或临床采集的样品、大批量采集的动物组织样品和不能立即冻存样品的RNA稳定与保存。经RNAwait浸润的组织或细胞,可在37℃保存1天,室温保存1周,4℃保存4周,-20℃/-80℃长期保存。RNA稳定存在不降解,取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。

产品优势

○ 抑制快速;

能够立即使RNA酶失活并稳定组织或细胞内RNA的试剂

○ 适用范围广;

适用于多种动物组织(如肝脏、脑、肺、脾脏、肾脏、肌肉组织等),还可用于酵母、细菌、真菌、细胞以及某些植物样品的RNA保存

○ RNA保护效果和液氮冻存效果一致;

本产品可以迅速渗透到组织内部,完全抑制RNase,避免RNA降解,保持组织RNA的完整性,从而完美保存组织中的基因表达谱,并且和液氮一样可以长期保存样品中的RNA。

○ 几乎完美兼容RNA所有分离方法;

如Trizol法、离心柱法和磁珠纯化法等。

○ 安全无毒,运输携带更便捷

本产品可室温使用,且无任何毒性和刺激性,确保实验者使用过程中的安全性。与液氮冻存相比,可以有效避免因因超低温操作而引起的冻伤、离心管爆裂等安全隐患,并且携带、运输非常方便。 

 

操作指南

1. 样品处理

1) 动物组织样品:将组织剪切成长宽高均不大于0.5厘米的组织块,迅速加入5-10倍体积的RNAwait。注意如骨头等液体渗透性较弱的组织,不适合用本品进行RNA保护。

2) 细胞样品:收集细胞沉淀,用PBS洗涤后,5000g离心1-2分钟,吸除PBS后小心加入5-10倍体积的RNAwait,避免吹起细胞。

3) 细菌样品:12000g离心2min,弃上清加入5-10倍体积RNAwait试剂,对酵母和真菌样品进行保存时,请参考细菌处理方法。

2. 样品保存

1) 浸透于RNAwait试剂中的样品在37℃可保存一天,室温保存一周,4℃保存一个月。

2) -20℃保存方法:样本4℃浸透过夜,然后转移至-20℃长期保存,RNAwait试剂不会在-20℃冻结,但有可能出现结晶。可直接放在室温融化,不会影响RNA的提取量和完整性。

3) -80℃保存方法:样本4℃浸透过夜,然后转移至-80℃长期保存(建议样品在转移至-80℃前将其从RNAwait中取出,直接冻于-80℃保存)。样本可直接放在室温融化,再重新冻上,不会影响RNA的提取量和完整性。

3. RNA提取

1) 组织样品:用干净的镊子从RNAwait中取出组织块,吸水纸吸掉表面液体,之后立即置于裂解液中匀浆或液氮中研磨。

2) 细胞和细菌等样品:加入与RNAwait等体积的DEPC处理水,10000g离心1min收集样品,小心去除上清,后续即可用各种方法提取RNA。酵母和真菌参考本方法提取RNA。

 

注意事项

1、本产品除保护RNA外,也可保护样品中的DNA和蛋白质的,但会导致蛋白质变性,不适用于天然蛋白质的提取。

2、本产品仅适用于新鲜组织样品或细胞样品。不可用于冰冻组织或细胞。

3、经本产品保存的样品,会变得微硬,为正常现象。

4、本产品存放过程中可能会出现沉淀,使用前放到37℃水浴中加热,沉淀溶解后不影响使用。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件

室温或4℃保存,2年有效。

 

 02 抑制RNA酶(RNase)小贴士 

       RNA酶(RNase)是很多经常进行RNA提取实验的同学不愿听到的敏感词汇。全副武装,用着剧毒试剂苯酚、氯仿好不容易提出来的RNA却被降解了,不甘心呀!!!今天我们就一起看下大名鼎鼎的Rnase到底是个什么来头。

       核糖核酸酶(RNase)或称RNA酶,是一种可将RNA水解成小分子组成的核酸酶。RNase作为一个小分子的蛋白,却异常的稳定。常规的高温高压蒸汽灭菌和蛋白抑制剂都不能使它完全失活,Rnase的稳定性主要来自于结构中的二硫键,比如常用的牛胰腺的Rnase只有124个氨基酸,却含有4个二硫键,二硫键赋予了Rnase极佳的热稳定性,此外rnase分子量又比较小,好多情况下又能很快的恢复原来的构象。

       除了具有极佳的稳定性,RNA酶在实验室无处不在。RNA酶是生物的一种防御机制,对于一个细胞来说外源性的RNA往往是致命的,相比于外源性的DNA,外源性的RNA往往更加危险,一不注意外源性的RNA就愉快的转录翻译了,所以几乎所有的生物都进化出了RNA酶用来防御外源性RNA的入侵。因此实验室培养的细菌细胞以及提取RNA的你都散发着RNA酶的香气,人类的体液(唾液、眼泪等)中含有大量的RNA酶,所以RNA降解了不要哭泣,越哭RNA降解越厉害!!黛玉姐姐不适合提取RNA!此外你娇嫩的肌肤上也含有居多的RNA酶,同样皮肤接触过的马克笔、移液器、冰箱门、门把手上都含有RNA酶啰嗦了那么一大堆,接下来我们要看下如何对付RNA酶。

       去除RNA大家首先想到的就是DEPC(焦碳酸二乙酯),DEPC主要是通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。0.1%的DEPC可以对Rnase起到比较好的去除效果,但是大家需要注意一点就是DEPC是已知明确的致癌物,所以在使用的时候需要尤其注意。对于RNA酶我们需要从两方面入手,第一个就是抑制内源性RNA酶的活性。常规的RNA提取试剂如Trizol里面含有的异硫氰酸胍和DTT可以打开RNA酶的二硫键,但是仍然还有一部分的RNA酶,尤其是组织样品,这时候就要注意低温。

1、组织样品取出后立马浸入液氮中,或者浸泡在商品化的RNA保存液中。

2、在提取细胞样品的RNA,加入裂解液中后在冰盒上进行裂

3、组织样品匀浆时最好使用液氮进行研磨,没有液氮使用电动匀浆器时注意把匀浆的适配器提亲充分预冷。

       第二个就是外源性的DNA酶:

1、全副武装,穿实验服,带口罩,一定要戴双新手套(不要那么勤俭节约了!!需要注意Trizol腐蚀性超强,隔着手套也很厉害,不要滴到手上) 

2、所有使用的枪头、EP管、PCR管等器具都要进行去RNA酶处理,可以使用0.1% DEPC浸泡后高压压一下,注意在通风橱里进行操作。土豪直接可以购买除酶的耗材。

     PS:告诉大家一个偷懒的方法,高温高压虽然不能全部去除RNA酶,但是会去掉很大一部分,高温高压2遍效果不错,提取RNA影响不大。

3、酒精可以使蛋白质变性,所以RNA提取的台面可以使用75%酒精檫拭,手套也可以使用酒精喷洒。

4、最后溶解RNA的溶液和离心管也要做去RNA酶处理,DEPC水是常用的RNA溶解液。要说下DEPC水的正确配制方法(商品化的DEPC买回来记得分装)

1:1000把DEPC加到超纯水中,摇匀后37℃静置过夜后,高温高压121℃灭菌15min即可。DEPC水可以1ml一管分装储存在-20℃。

 

 最后归纳一下!

 以上的方法都OUT啦!使用美仑MA0208 RNA保存液才最有效 

 

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