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细胞铺板:铺得均匀的小技巧
2015-01-22  来源:美仑生物 技术部

 

 

做细胞生物学实验,细胞铺板大概是最常见的一个实验。但是有很多人不是很得要领,铺得不是很均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。咋整?分享以下几点经验以飨各位。

一般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。

6孔板、12孔板或24孔板,我均采用将第一个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间,中间细胞多,而加在周边晃匀后会出现周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板好,所以我放弃改用浸润孔底的方法。

细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。如果实验室有平板振荡器的话,我建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,就是振幅小,频率高的那种。

细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮。还有转移到六孔板后,是要晃得!晃的时候最好不要让那个细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了,就会不均匀。

一瓶细胞长满后,正常处理,在培养瓶里吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭,然后放到培养箱里,轻微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。

计算好所需要的全部液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃,显微镜下观察,如果不均匀,按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话,在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子,瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。

放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向5到6次,但关键的是摇完后最好直接放入培养箱中,不要再做过多的运动,例如放到镜下去看,否则很容易就又聚到中间去了。

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